Раздел:              Трансфекция – реактивы для трансфекции эукариотических клеток серии GenJect

Продукты

Стоимость реагентов фиксирована в рублях и не подстраивается под курс доллара, кризисы, эмбарго и другие форс мажорные обстоятельства.

По запросу мы бесплатно высылаем тестовые фасовки реактивов (по 100 мкл).

Кат. номер	Описание	Цена (без НДС)
• GenU-500p	Реагент GenJector™-U*, 500 мкл *устаревший реагент	10 500 руб.
• GenU-1000p	Реагент GenJector™-U*, 1000 мкл	20 000 руб.
• Gen39-500p	Реагент GenJect™-39, 500 мкл	10 500 руб.
• Gen39-1000p	Реагент GenJect™-39, 1000 мкл	20 000 руб.
• Gen40-500p	Реагент GenJect™-40, 500 мкл	10 500 руб.
• Gen40-1000p	Реагент GenJect™-40, 1000 мкл	20 000 руб.
Крупные фасовки для любого из реагентов:
-5Kp	5 мл	99 900 руб. включая доставку
-10Kp	10 мл	180 000 руб.
-40Kp	40 мл	700 000 руб.

Стоимость заказа более 40 мл, а также сотрудничество обсуждаются в индивидуальном порядке.

Реактивы GenJect™-39 и GenJect™-40 обладают эффективностью до 2 раз превосходящей реактив GenJector™-U. Реактив GenJector™-U остается доступен для заказа для использования в уже отработанных методиках, однако мы рекомендуем протестировать новые реактивы на замену.

Реактивы GenJect™-39 и GenJect™-40 отличаются составом липидов, включая основной активных катионный липидный компонент. Какой из реактивов будет более эффективен для данной конкретной задачи определяется характером и составом нуклеиновой кислоты, буферами для формирования комплексов, трансфекции и культивирования клеток, а также клеточной линии.

Мы рекомендуем тестировать оба реактива под каждую конкретную задачу.

Например, в среднем, для доставки плазмидной ДНК, в большинстве случаев, более эффективен реагент GenJect™-39, тогда как открытые линейные длинные и короткоцепочечные нуклеиновые кислоты (mRNA или siRNA) преимущественно лучше доставляются с помощью GenJect™-40. При этом, однако, в отдельных случаях, GenJect™-39 показывает эффективность в разы выше, чем GenJect™-40, для доставки олигонуклеотидов. С покупкой любого реактива мы отправляем пробный образец (100 мкл) второго реактива бесплатно.

Наши реактивы успешно используются многочисленными академическими и коммерческими организациями России, включая Институт Биологии Гена (ИБГ, Москва), Институт Молекулярной Биологии им. В.А. Энгельгардта (ИМБ, Москва), Институт Биоорганической Химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова (ИБХ, Москва), Институт Биомедицинской Химии имени В.Н.Ореховича (ИБМХ, Москва), Институт Физико-Химической Медицины (НИИ ФХМ, Москва), МГУ им. М.В.Ломоносова (Москва), Институт Биологии Развития им. Н.К. Кольцова (ИБР, Москва), Сколтех (Москва) ФИЦ Биотехнологии (Москва), НМИЦ гематологии (Москва), Московский Физико-Технический Институт (МФТИ, Долгопрудный), Институт Экспериментальной Медицины (Санкт-Петербург), Университет ИТМО (Санкт-Петербург), Институт молекулярной и клеточной биологии (ИМКБ, Новосибирск), Институт Химической Биологии и Фундаментальной Медицины (Новосибирск), и многие другие.

Токсичность для клеток

Выживаемость клеток на 2-ой день после трансфекции при оптимальных условиях трансфекции составляет от 90 до 70% в зависимости от трансфицируемой клеточной линии.

Рис. 1. Уровень трансфекции и выживаемость клеток HEK293T при трансфекции комплексами GenJect™-39/turboGFP-C (1,5 мкг плазмиды на 1 мл ростовой среды) на 2ой день после трансфекции в 96 луночных планшетах. A. Уровень флуоресценции GFP в трансфицированных клетках и выживаемость клеток в %, измеренная по окрашиванию пропидий-иодидом. В. Фотографии клеток для лунок с 2.7 мкл реактива GenJect™-39 на 1 мл ростовой среды в проходящем свете (top left), в фильтре флуоресценции GFP (top right), в фильтре флуоресценции Propidium Iodide (bottom left), наложение флуоресценции GFP и пропидий иодида (bottom right). На фотографии с пропидий иодидом крупные пятна – ядра мертвых клеток, мелкие точки – оставшиеся интактные комплексы GenJect™-39/ДНК.

Указанные в методике концентрации реактива и нуклеиновой кислоты рекомендованы для трансфекции при конфлюентности 75-85% на момент добавления комплексов. Низкая конфлюентность повышает нагрузку реактива/ДНК на единичную клетку, что неизбежно приводит к повышению токсичности. Кроме того, уровень токсичности сильно зависит от линии клеток и условий культивирования и трансфекции.

Для низкой конфлюентности, а также при проявлении высокой токсичности по любой другой причине НЕОБХОДИМО снижать нагрузку комплексами GenJect™ с нуклеиновой кислотой при сохранении соотношения реактив/нуклеиновая кислота до достижения приемлемого уровня токсичности.

ВАЖНО!!! Процент трансфицированных клеток определяется клеточной линией, характером нуклеиновой кислоты, методом (реактивом) и условиями трансфекции и достигает максимума при экспериментально определяемой ОПТИМАЛЬНОЙ нагрузке реагентом при заданной нагрузке нуклеиновой кислотой. При сохранении того же количества нуклеиновой кислоты, дальнейшее повышение количества реагента НЕ ПРИВЕДЕТ к значимому повышению ПРОЦЕНТА трансфицированных клеток, но всегда приводит к снижению абсолютного числа трансфицированных клеток за счет клеточной гибели (см. Рис. 2А и 3В). Процент трансфекции можно попытаться увеличить через одновременное повышение нагрузки реагентом И нуклеиновой кислотой.

Сравнение с коммерческими аналогами

Реактивы GenJect™-39 и GenJect™-40 обладают эффективностью трансфекции, идентичной или превосходящей популярные реактивы Lipofectamine© 3000 и Metafectene©.

Рис. 2. Трансфекция клеток CHO-K1 комплексами GenJect™-39, Lipofetamine© 3000 и Metafectene© с плазмидой turboGFP-C (1,5 мкг плазмиды и 0.7, 2 и 6 мкл реактива для трансфекции на 1 мл ростовой среды). 2ой день после трансфекции в 96-луночных планшетах. А. Микрофотография культур клеток в фильтре флуоресценции GFP. B. Интегральный уровень флуоресценции GFP в лунках (измеренный на планшетном флуориметре).

Рис. 3. Трансфекция клеток HeLa комплексами GenJector™-U, GenJect™-39, GenJect™-40, Lipofetamine© 3000 и Metafectene© с плазмидой, кодирующей ядрышковый белок B23 (1 мкг плазмиды на 1 мл ростовой среды). 2ой день после трансфекции в 12-луночных планшетах со стеклами. А. Трансфекция 2 мкл реагента на 1 мл ростовой среды. Сверху. Микрофотография в фильтре флуоресценции GFP. Снизу. FACS анализ популяции клеток с указанием процента трансфицированных клеток от общего. В. Процент трансфицированных клеток по результатам 2 независимых экспериментов. 3 uL Metafectene© в данном дизайне эксперимента были чрезвычайно токсичны для клеток (выживаемость клеток менее 10%, оставшиеся клетки ошарены). Данные любезно предоставлены с.н.с., к.б.н. Саидовой А. (каф. клеточной биологии и гистологии МГУ им М.В. Ломоносова).

Приложения

Ко-трансфекция несколькими плазмидами

Реактив GenJector-U успешно используется для котрансфекции клеток 3-5 плазмидами одновременно, в частности для экспрессии мультисубъединичных мембранных рецепторов: никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (мышечный нАХР, a7 нАХР), рецепторы гамма-аминомасляной кислоты (GABA-A) для целей patch-clamp и электрофизиологии. Также с помощью ко-трансфицированного с рецепторами a7 нАХР цитоплазматического белкового кальциевого сенсора Case12 (Evrogen, Россия) был исследован рецептор-опосредованный вход кальция внутрь клеток. Данные любезно предоставлены сотрудниками отдела молекулярной нейроиммунной сигнализации, Институт Биоорганической Химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова, РАН.

Рис. 4. Ко-трансфекция клеток neuro2a а7 никотиновым ацетилхолиновым рецептором и цитоплазматическим кальциевым сенсором Case12 (котрансфекция 3 плазмидами) с помощью реактива GenJector-U.

Рис. 5. Ко-трансфекция клеток neuro2a субъединицами рецептора мышечного никотинового ацетилхолинового рецептора (котрансфекция 4 плазмидами) с помощью реактива GenJector-U с визуализацией собранного мембранного рецептора по связыванию с Alexa FI555-aBgt . А. Микрофотография клеток в проходящем свете. В. Микрофотография в фильтре флуоресценции Alexa FI555 с указанием процента трансфицированных клеток. С. Субъединичная структура мышечного никотинового ацетилхолинового рецептора.

Рис. 6. Ко-трансфекция клеток neuro2a субъединицами рецептора гамма-аминомасляной кислоты GABA-A (котрансфекция 4 плазмидами) с помощью реактива GenJector-U. Рецептор детектировался по связыванию с Alexa-мечеными бунгаротоксином и кобратоксином.

Трансфекция олигонуклеотидов

Реактивы серии GenJect могут быть использованы для доставки коротких олигонуклеотидов, в частности siRNA для knock-down экспериментов (Рис. 7). Полные условия и результаты эксперимента приведены в файле Пример доставки siRNA. Данные любезно предоставлены с.н.с., к.б.н. Саидовой А. (каф. клеточной биологии и гистологии МГУ им М.В. Ломоносова).

Рис. 7. Knock-down трех генов Bax, Bak и Bim с использованием для доставки siRNA реактивов Metafectene© и GenJect-40™. Эффективность knock-down оценивали методами RT-PCR (A) и иммуноблоттингом (B). В результатах RT-PCR для каждого реактива и белка приведены данные 2 независимых экспериментов по knock-down. Количество cDNA в RT-PCR нормировано на трансфекцию контрольным si олигонуклеотидом (siGFP) по каждому из экспериментов индивидуально. Ctrl – необработанные клетки, siTarget – трансфекция siRNA против целевого гена, siGFP – трансфекция siRNA против GFP белка (см. подробное описание эксперимента).

Методика трансфекции

Краткая методика трансфекции с использованием реактивов серии GenJect:

1. Нарастить клетки до необходимой плотности/конфлюентности. Перед трансфекцией заменить ростовую среду.
2. Разбавить реактив для трансфекции серии GenJect в буфере для комплексообразования. Инкубировать 5-15 мин.
3. Разбавить ДНК/РНК в буфере для комплексообразования и по каплям добавить к разбавленному реактиву GenJect.
4. Инкубировать комплексы 15-20 мин.
5. По каплям добавить комплексы GenJect/нуклеиновая кислота к клеточной культуре в полной ростовой среде (на этом этапе возможно использование сред с добавлением сыворотки крови) и перемешать круговыми движениями планшета (в случае трансфекции в формате планшетов).
6. По мере необходимости поменять среду с комплексами на свежую ростовую среду. Культивировать клетки 16-72 ч до анализа на трансгены.

Полная подробная методика использования реактивов серии GenJect, а также методика трансфекции в виде графической схемы приведены ниже.

• Методика трансфекции эукариотических клеток реактивами серии GenJect

• Схема трансфекции эукариотических клеток реактивами серии GenJect

______________________________________________________________________________________

Оплата

• Оплата осуществляется в рублях на расчетный счет поставщика в соответствии с договором поставки или в рамках прямой закупки без договора.
• Возможны любые варианты оплаты по желанию заказчика (100% предоплата, частичная предоплата, например, 30-70, или 100% постоплата).
• По умолчанию счет выставляется без НДС. При необходимости расчета с НДС, цена увеличивается на сумму НДС.

Доставка

Сроки доставки зависят от региона и способа доставки. Доставка осуществляется из г. Москва и оплачивается дополнительно к стоимости товара. По г. Москва возможна любая курьерская доставка в день заказа. Для доставки в другие регионы, по умолчанию, мы предлагаем использовать EMSPost. Другие способы доставки по согласованию с заказчиком.

Контакты

Получить консультацию и оставить заказ Вы можете по телефону +7 926 268 42 30 или по email irishel.tech@gmail.com.